Цалкам аўтаматычная машына для экстракцыі і выяўлення нуклеінавых кіслот New Tech

Пяць сіл:
● Прыбор, настроены на этап экстракцыі нуклеінавых кіслот і ачысткі
● Прыбор, настроены з ультрагукавым модулем экстракцыі
● Прыбор цалкам аўтаматычны
● Прыбор, сканфігураваны з узмацненнем зменнай тэмпературы
● Прыбор, сканфігураваны з цалкам закрытым наборам рэагентаў

1.Ці патрэбна экстракцыя і ачыстка рэагентаў для выяўлення нуклеінавых кіслот?
Прынцып выяўлення нуклеінавых кіслот заключаецца ў наступным: пад дзеяннем праймера ДНК-полимераза выкарыстоўваецца для ажыццяўлення ланцуговай рэакцыі ампліфікацыі на матрычнай ДНК/РНК (патрабуецца зваротная транскрыпцыя NA), а затым выяўляецца колькасць вызваленага флуоресцентного сігналу для вызначэння ці ўтрымлівае ўзор нуклеінавую кіслату (ДНК/РНК) узбуджальніка, які трэба выявіць.

1) Узоры, якія не былі экстрагаваныя або ачышчаныя, могуць утрымліваць шмат кампанентаў, якія ўплываюць на канчатковы вынік: нуклеазу (якая можа раствараць мэтавую нуклеінавую кіслату і выклікаць ілжыва адмоўны вынік), пратэазу (якая можа зніжаць узровень ДНК-палімеразы і выклікаць ілжыва адмоўны вынік), цяжкія металы соль (якая прыводзіць да інактывацыі сінтазы і выклікае прытворнададатныя вынікі), занадта кіслы або занадта шчолачны PH (што можа выклікаць рэакцыя на збой), няпоўная РНК (прыводзячы да ілжываадмоўнай недастатковасці зваротнай транскрыпцыі).

2)Некаторыя ўзоры цяжка ўзмацніць непасрэдна: грамстаноўчыя і некаторыя паразіты, з-за іх тоўстых клеткавых сценак і іншых структур, калі яны не праходзяць праз працэс экстракцыі і ачысткі нуклеінавых кіслот, набор без экстракцыі можа выйсці з ладу. ўзоры.

Такім чынам, рэкамендуецца выбраць тэставы набор або прыбор, сканфігураваны з этапам экстракцыі нуклеінавай кіслаты.

2. Хімічная экстракцыя або фізічная ультрагукавая экстракцыя фрагментацыяй?
Наогул кажучы, хімічная экстракцыя можа прымяняцца да большай часткі папярэдняй апрацоўкі і ачысткі. Аднак у таўстасценных грамположительных бактэрый і некаторых паразітаў таксама бывае, што хімічная экстракцыя не можа атрымаць эфектыўныя матрыцы нуклеінавых кіслот, што прыводзіць да ілжываадмоўнага выяўлення. Акрамя таго, пры хімічнай экстракцыі часта выкарыстоўваюцца моцныя агенты, калі элюіраванне не будзе дбайным, у рэакцыйную сістэму лёгка ўвесці моцную шчолач, што прывядзе да недакладных вынікаў.

Ультрагукавая фрагментацыя выкарыстоўвае фізічнае драбненне, якое паспяхова выкарыстоўваецца GeneXpert, вядучым прадпрыемствам у галіне POCT для выкарыстання чалавекам, і мае абсалютную перавагу ў экстракцыі нуклеінавых кіслот некаторых складаных узораў (напрыклад, Mycobacterium tuberculosis).

Такім чынам, рэкамендуецца выбраць тэставы набор або інструмент, настроены на этап экстракцыі нуклеінавых кіслот. і аптымальна, калі ёсць модуль ультрагукавой экстракцыі.

3. Ручной, паўаўтаматычны і цалкам аўтаматычны?
Гэта праблема кошту працы і эфектыўнасці працы. У цяперашні час бальніцы для хатніх жывёл не маюць дастатковай колькасці персаналу, а вылучэнне і выяўленне нуклеінавых кіслот - гэта праца, якая патрабуе пэўных навыкаў і вопыту. Без сумневу, цалкам аўтаматычная машына для экстракцыі і выяўлення нуклеінавых кіслот - ідэальны выбар.

4. Пастаяннае ўзмацненне тэмпературы або зменлівае ўзмацненне тэмпературы?
Рэакцыя ампліфікацыі - гэта звяно выяўлення нуклеінавых кіслот, і прафесійная тэхналогія, задзейнічаная ў гэтым звяне, складаная. Груба кажучы, ферменты выкарыстоўваюцца для ампліфікацыі нуклеінавай кіслаты. У працэсе ампліфікацыі выяўляецца ўзмоцнены сігнал флуарэсцэнцыі або ўбудаваны сігнал флуарэсцэнцыі. Наогул кажучы, чым раней з'яўляецца сігнал флуарэсцэнцыі, тым большае ўтрыманне мэтавага гена ва ўзоры.

Узмацненне пры пастаяннай тэмпературы - гэта ўзмацненне нуклеінавых кіслот пры фіксаванай тэмпературы, у той час як узмацненне пры зменнай тэмпературы - гэта цыклічнае ўзмацненне ў строгай залежнасці ад дэнатурацыі-адпалу-пашырэння. Час узмацнення пастаяннай тэмпературы быў выкананы, у той час як час узмацнення зменнай тэмпературы ў значнай ступені залежыць ад хуткасці павышэння і падзення тэмпературы прыбора (у цяперашні час многія вытворцы змаглі зрабіць 40 цыклаў узмацнення прыкладна за 30 хвілін).

Калі лабараторныя ўмовы добрыя і занаванне строгае, разумна сказаць, што розніца ў дакладнасці паміж імі не будзе вялікай. Аднак ампліфікацыя з пераменнай тэмпературай сінтэзуе больш прадуктаў нуклеінавых кіслот за адносна больш кароткі час. У лабараторыях без строгага занавання і прафесійнай падрыхтоўкі персаналу рызыка ўцечкі аэразоля нуклеінавай кіслаты будзе большай, ілжывы станоўчы вынік узнікае, калі адбываецца ўцечка, і ліквідаваць яе вельмі складана.

Акрамя таго, ампліфікацыя пры пастаяннай тэмпературы таксама больш схільная да неспецыфічнай ампліфікацыі, калі ўзор складаны (адносная тэмпература рэакцыі ніжэй, і чым вышэй тэмпература падаўжэння, тым лепшая спецыфічнасць звязвання праймера).

Што тычыцца сучаснай тэхналогіі, узмацненне зменнай тэмпературы з'яўляецца больш надзейным.

5. Як пазбегнуць рызыкі ўцечкі прадуктаў ампліфікацыі нуклеінавых кіслот?
У цяперашні час многія вытворцы выбіраюць прабірку для ПЦР са зменнай тэмпературай у якасці прабіркі для рэакцыі нуклеінавых кіслот, якая герметызавана трэннем, і тэмпературная дэнатурацыя пры зменнай тэмпературы пры ПЦР-ампліфікацыі з пераменнай тэмпературай дасягае 90 градусаў.
Цэльсій . Паўторны працэс пашырэння з дапамогай цяпла і сціскання з дапамогай холаду з'яўляецца вялікай праблемай для герметызацыі прабіркі для ПЦР, а прабірка для ПЦР са залозам адносна лёгка можа выклікаць уцечку.

Пажадана праводзіць рэакцыю з цалкам герметычным наборам/прабіркай, каб пазбегнуць уцечкі прадукту рэакцыі. Было б ідэальна, калі б можна было распрацаваць цалкам герметычны набор для экстракцыі і выяўлення нуклеінавых кіслот.

Такім чынам, новая цалкам аўтаматычная машына для экстракцыі і выяўлення нуклеінавых кіслот ад New Tech мае пяць вышэйзгаданых аптымальных варыянтаў.